生化实验试题参考

生化实验试题参考

　　篇一：生物化学实验考试试题(完整版)

　　生物化学实验

　　二、填空题：

　　1. 测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚试剂法（或Lowry法） )和 （考马斯亮

　　蓝G-250染色法）。

　　2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以（以一定时间内分解的H2O2量）来表示，当CAT

　　与H2O2反应结束，再用 （碘量法） 测定未分解的H2O2。

　　3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以 （聚丙烯酰胺凝胶） 作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由（Acr） 和交联剂（Bis） 在催化剂作用下聚合而成。化学聚合法一般用来制备（分离）胶，其自由基的引发剂是（Ap），催化剂是（TEMED） ；光聚合法适于制备大孔径的（浓缩）胶，催化剂是（核黄素） 。

　　4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：（吸附层析），（分配层析 ），（离子交换层析），（凝胶层析 ）和 （亲和层析） 。

　　5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管（等重）且对称放入离心机。

　　6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S的亲合力愈（大） ，Km愈大，表示E对S

　　的亲合力愈（小） 。

　　7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须__（打开）____（打开、合上）样品池翻盖。

　　8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的（抗逆性）密切相关。

　　9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。

　　10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由 和交联剂 在催化剂作用下聚合而成的，在具有自

　　由基团体系时，两者就聚合。引发产生自由基的方法有两种：（化学法）和（光聚合法）。

　　11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：（柱层析），（纸层析），（薄层层析）和（薄

　　膜层析）。

　　参考答案：

　　生物化学实验

　　一、名词解释：

　　1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。

　　2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。

　　3、分配层析法：用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。

　　4、酶活性：酶催化化学反应的能力，往往以酶促反应的初速度表示。

　　5、分光光度法：基于溶液对光吸收的大小来确定被测组份的含量的分析方法称为分光光度法或吸光光度法。

　　6、层析技术：是利用被分离的混合物中各组分的理化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、

　　分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度在流动相和固定相中进行分配，最终达到分离

　　目的。

　　7、比活力：即每毫克酶蛋白所含酶的活力单位数。比活力高，表示酶纯度高。

　　二、填空题：

　　9. 丙烯酰胺单体（Acr），N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis）

　　1、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。

　　答：(1)考马斯亮蓝G-250染色法：

　　考马斯亮蓝G-250结合蛋白质后，形成蓝色CBG-蛋白质结合物，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白质浓度范围内（10-1000ug/ml），CBG-蛋白质结合物的O.D595nm值与蛋白质含量成正比，故可用分光光度法进行蛋白质的定量测定。

　　（2）双缩脲法：

　　蛋白质含有两个以上的肽键（-CO-NH-）因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色络合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比，而与蛋白质的相对分子质量及aa成分无关，故可以用来测定蛋白质含量；

　　（3）Folin-酚试剂法（Lowry法）：

　　是双缩脲法的发展，第一步涉及到碱性溶液中铜蛋白质复合物的形成，然后这个复合物还原磷钼酸－磷钨酸试剂，产生深蓝色（钼蓝和钨蓝混合物）比双缩脲法灵敏，但费时；

　　（4）紫外吸收法：

　　蛋白质中一些氨基酸残基中的苯环含有共轭双键，所以蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm处，在一定范围内，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质含量成正比，可用作定量测定，简单、灵敏、快速、不耗样品，低浓度的盐类不干扰。

　　（5）微量凯式定氮法：

　　根据蛋白质的平均含氮量为16%，因此，测得1g蛋白氮，相当于6.25g蛋白质。

　　2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。

　　答：三个不连续：（1）凝胶由上下两层凝胶组成，两层凝胶的孔径不同；

　　（2）缓冲液离子组成及各层凝胶的pH不同；

　　（3）在电场中形成不连续的电位梯度。

　　三种物理效应：（1）电荷效应：酶蛋白按其所带电荷的种类及数量，在电场作用下向一定的电极以一定的速

　　度泳动。

　　（2）分子筛效应：分子量、形状不同的分子在经过凝胶孔径过程中，受到的阻力不同，因此

　　移动速率不等。

　　（3）浓缩效应：使待分离样品中的各组分在浓缩胶中被压缩成层，使原来很稀的样品得到高

　　度的浓缩。

　　3、试分析影响电泳的主要因素有哪些？

　　答：（1）带电颗粒的大小和形状：颗粒越大，电泳速度越慢，反之越快；

　　（2）颗粒的电荷数：电荷越少，电泳速度越慢，反之越快；

　　（3）电场强度：电场强度越小，电泳速度越慢，反之越快；

　　（4）溶液的pH值：影响被分离物质的解离度，离等电点越近，电泳速度越慢，反之越快；

　　（5）溶液的粘度：粘度越大，电泳速度越慢，反之越快；

　　（6）离子强度：离子强度越大，电泳速度越慢，反之越快；

　　（7）电渗现象：电场中，液体相对于固体支持物的相对移动；

　　（8）支持物筛孔大小，孔径越小，电泳速度越慢，反之越快。

　　篇二：生化实验试题

　　改良Lowry氏法测定蛋白质含量，醋纤膜电泳及凝胶层析分离蛋白质和SDS-PAGE三个实验属于蛋白质的内容，琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制和检测谷丙转氨酶活性属于酶的部分，观察激素对家兔血糖浓度的影响涉及信号转导和糖代谢章节的知识，质粒抽提、核酸电泳及PCR属于分子生物学的范畴。

　　一、选择题

　　1．本学期所做的聚丙烯酰胺凝胶电泳实验主要用来分离（ ）

　　A．核酸B．甘油三酯 C．糖 D．蛋白质

　　2．有关琥珀酸脱氢酶竞争性抑制实验的论述，错误的是（ ）

　　A．抑制剂结构与底物相似 B．抑制剂与酶的活性中心相结合

　　C．抑制剂与酶的结合是可逆的 D．抑制程度只与抑制剂的浓度有关

　　3．某学生用100ul可调微量移液器吸取68ul溶液，应该将此微量移液器刻度调为（

　　A. 068.0 B. 032.0 C. 680.0 D. 006.8

　　4．用Sephadex G-50分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的层析方法称( )

　　A．离子交换层析 B．凝胶层析

　　C．亲和层析D．高效液相层析

　　5．在琼脂糖凝胶电泳中，使核酸在紫外透射仪下显色的是（ ）

　　A．氨基黑B．溴酚蓝 C．溴化乙锭 D．考马斯亮蓝

　　6．醋酸纤维素薄膜分离血清蛋白质时，各血清蛋白的泳动速率从小到大依次是（

　　A．α 1，α 2，β，albumin，γ globin B．albumin，α 1，α 2，β，γ globin

　　C．γ globin ，β，α 2，α 1，albumin D．γ globin，β，α 1，α 2，albumin

　　7．有关标准曲线法的描述，错误的是 （ ）

　　A．需要配制较多的标准管

　　B．待测管吸光度范围0.05-1.0 为宜

　　））

　　C．标准管与待测管的测定应在相同条件

　　D．所作标准曲线可供长期使用

　　8．一个基本的PCR反应体系应该包括（）

　　A．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Mg2+，primase，dNTPS，水

　　B．模板，Taq酶，PCR Buffer，Ca2+，primers，dNTPS，去离子水

　　C．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Ca2+，primase，dNTPS，去离子水

　　D．模板，Taq酶，PCR Buffer，Mg2+，primers，dNTPS，去离子水

　　9．对蛋白质定量的方法不包括（ ）

　　A．凯氏定氮法B．改良Lowry氏法

　　C．抽提法 D．紫外吸收

　　10．用分光光度法进行定量分析时，基本计算公式是（ ）

　　A．待测液浓度=（标准液吸光度/待测液吸光度）×标准液浓度

　　B．待测液浓度=（待测液吸光度/标准液吸光度）×标准液浓度

　　二、填空题

　　1．制备聚丙烯酰胺凝胶时催化剂是。

　　2．PCR可在体外对目的基因进行高效、快速、特异的扩增，它的每个循环包括三个步骤，分别是变性___、___退火____、__延伸___。

　　3．琥珀酸脱氢酶竞争性抑制过程中，加入液体石蜡的作用是实验中使用的抑制剂是丙二酸 。

　　4．ALT或GPT缩写代表，催化的反应是 。血清中ALT（GPT）活性单位的定义是：每毫升血清在pH7.4，37℃保温条件下与底物作用30min后，每生成_2.5_μg的丙酮酸为1个谷-丙转氨酶活性单位。

　　5． 分光光度计使用完毕时，为了延长仪器的使用寿命，滑杆应该放在光源对准_1档和2档交界处______休息态__的位置。

　　6．PCR总反应体系的体积是50μl，其中10×buffer加量应为_5__μl。

　　7．酵母核酸定量中，总磷管需要进行反应，将有机磷转变为需要用的重要试剂是 ，试剂酒精灯加热反应过程经历颜色变化为 。

　　8．用离心机离心前，必须将装有样品的离心管_配平_______，并_____对称______放置于离

　　心机的离心平台上，然后盖好上盖，才能开启电源。

　　9．激素对家兔血糖浓度的影响实验中，升高血糖的激素是 肾上腺素，降低血糖的激素是 胰岛素 。

　　三、判断题

　　1. 蛋白质在小于等电点的pH溶液中，带负电，电泳时向正极移动。（ F ）

　　2. Lambert-Beer定律公式为A=KcL，其中K为消光系数，表示物质对光线吸收的能力。（T）

　　3. 酵母核酸提取实验中，甲苯的作用是使蛋白质变性。（）

　　4. 聚合酶链式反应（PCR）必需明确待扩增基因片段的全部序列。（ ）

　　5. 琼脂糖电泳分离核酸时（pH7.4），核酸样品应点在负极端。（ T）

　　6. 血糖测定实验中，兔血经加抗凝剂离心后所得到的上清液是血清。（ F ）

　　四、简答题

　　1．简要叙述分光光度计使用方法。

　　开机，调至要使用的波长，预热20min

　　将待比溶液倒至比色杯中，高度为2/3-4/5，手拿毛面，朝向自己，放入样品室

　　调至T档，拉杆拉至0档（空白管），调节T=100%

　　拉杆拉至1档，调节T=0

　　调至A档，拉杆拉至2,3。。。档，读取标准液、待测液的吸光度

　　取出后关机

　　2. 简述改良Mohum法测定谷丙转氨酶GPT活性实验中对照管的作用？

　　五、实验计算题

　　1. 采用邻甲苯胺法测定血糖浓度。

　　葡萄糖标准液（0.4 mg/ml）取0.5ml，待测血浆取0.1ml。

　　邻甲苯胺显色（反应总体积均为7ml）后，620nm波长比色，以空白管调零后读得：A标 = 0.400；A测 = 0.220

　　请按照上述条件采用标准管法计算待测血浆中血糖的浓度（以mg/100ml为单位）。 C=(0.220/0.1)/(0.400/0.5)*0.4*100=110

　　篇三：生物化学实验理论考试题答案

　　生物化学实验理论考试题答案

　　1. 醋酸纤维薄膜电泳时点样端应靠近电极的哪一端，为什么？

　　答；电泳时点样端应靠近负极，因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。

　　2. 用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的作用,为什么？

　　答；空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。

　　3. 简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜的电泳原理？

　　答；血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为8.6时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。

　　4. 何谓Rf值？影响Rf值的因素？

　　答;Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关，对同一种物质来讲Rf是一个常量。

　　5. 什么是盐析？盐析会引起蛋白质的变性吗？一般用什么试剂?

　　答;盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性，因为蛋白质的结构并未发生改变，去掉引起盐析的因素蛋白质仍能溶解；一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析

　　6. 简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？

　　答;还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度

　　计 测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。

　　7. 影响蛋白质沉淀的因素是什么？沉淀和变性有什么联系？

　　答;水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶

　　体颗粒，在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。变性蛋白质不一定沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。沉淀时蛋白质可能仍然保持天然构像，而变性是蛋白质的高级结构被破坏失去活性。

　　8. 简述薄层层析法分离糖类的原理/?

　　答;薄层层析的实质就是吸附层析，也就是在铺有吸附剂的薄层上，经过反复地被吸附剂吸附以及被扩展剂扩展的过程。而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的涌动速度不同达到分离的目的

　　9. 等电点的定义？蛋白质在等电点时有哪些特点？

　　答;当溶液的PH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为零，此时的PH值就是该蛋白质等电点。蛋白质在等电点时的溶解度最小。

　　10. 蛋白质显色黄色反应的原理是什么?反应结果为什么深浅不一？

　　答;含有苯环的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黄色的物质，而且不同蛋白质中所含的苯环数量不同，造成与试剂反应的程度不同，因此呈现颜色深浅不一 。

　　11. RNA水解后的三大组分是什么？怎样各自验证的？

　　答;核糖，磷酸，嘌呤碱。核糖+苔黒酚—Fe（浓HCI）绿色物质；磷酸+钼酸铵——蓝色；嘌呤碱+硝酸银——白色

　　12. 等电点时为什么蛋白质溶解度最低？

　　答;蛋白质形成胶体二等条件是带电荷，从而在外表面形成水化膜，导致各胶体颗粒不结合，当PH等于PI时，静电荷为零，蛋白质分子之间不存在排斥，则聚集沉淀，所以在等电点时溶解度最小。

　　13. 鸡蛋清可以用作铅汞中毒的解毒剂是为什么?

　　答;由于重金属离子能与蛋白质中带负电基团如—COOH等作用，生成难溶重金属的蛋白质盐，减少机体对重金属的吸收。

　　14. 血清醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白依次分为哪几条带？哪带电泳最

　　快？影响电泳速度有哪些？

　　答;有血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、r-球蛋白；其中血清蛋白点用最快。影响因素蛋白质所带电荷数，分子大小与形状以及缓冲液浓度。

　　15. 什么是抑制剂？什么是变性剂？区别是什么？

　　答;凡是能使酶活性降低而不使酶失活变性的物质成为抑制剂；凡是能引起蛋白质变性失活的物质叫变性剂。抑制剂只是抑制蛋白质的特性而变性剂则破环蛋白质的结构。

　　16 简述橘皮中提取果胶原理？

　　答；果胶不溶于乙醇的原来将其沉淀得到果胶。

　　17 离心管如何在天平上平衡？操作离心时应注意什么?

　　答;把放在小烧杯中的离心管（包括盖子）和管套放在平衡的天平上，用胶头滴管取离心液调平。注意点：配平、等重的试管放在对称的位置；启动时要先盖好盖子，停止后才能开盖；有不正常的声音时应按STOP键,而不是POWER键；禁止把小而中的东西放在离心机上以防伤人。

　　篇四：生化实验题库

　　生物化学实验考核试题库

　　要求：参加考核的每位学生须从1－6号题中随机抽1题，从7－12号题中随机抽1题，从13－37号题中随机抽1题，从38－46号题中随机抽1题，共计4道考核题进行考核，总分为60分。

　　一、理论考核题

　　1盐析和盐溶（3分） 2电泳（3分） 3层析（色谱）（3分） 4酶的活力单位（3分）5比活力（3分） 6分子筛效应（3分） 7电泳的原理（4分）

　　8离子交换层析的原理（4分）9亲和层析的原理（4分）

　　10凝胶过滤层析的原理（4分）

　　11吸附层析的原理（4分）

　　12透析技术的基本原理及其应用（4分）

　　13聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用途（6分）

　　14按层析过程的机理，层析法分哪四类？按操作形式不同又分哪三类？（7分） 15普通离心机的使用注意事项？（6分）

　　16可见分光光度计的使用注意事项？（6分）

　　17蛋白质含量测定的常用方法有那些？（6分）

　　18粗脂肪的提取和含量测定的基本原理（6分）

　　19索氏提取器是由哪几部分组成的？（6分）

　　20粗脂肪的提取和含量测定的简要操作步骤（6分）

　　21粗脂肪的提取实验中如何减少误差？（6分）

　　22凯氏定氮法测定总氮量的基本原理（6分）

　　23凯氏定氮实验中用到的主要器材有哪些？（6分）

　　24核酸的含量测定常用的方法有哪些？（6分）

　　25双倒数法测定米氏常数的基本原理（6分）

　　26双倒数法测定米氏常数的实验中，决定实验成败的因素有哪些？关键因素是什么？（7分）

　　27生物细胞的破碎的常用方法有哪些？（6分）

　　28酶的制备及提取过程中常注意哪些事项？（6分）

　　29蛋白质的分离常用的方法有哪些？（6分）

　　30甲醛滴定法测定氨基酸的基本原理（6分）

　　31为什么SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用来测定未知蛋白质的相对分子质量？（6分） 32连续聚丙烯酰胺凝胶电泳与不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么不同？（6分） 33聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点？（6分）

　　34琼脂糖凝胶电泳的优点？（6分）

　　35提取某种植物组织中的总DNA时，使用的细胞提取液中的主要试剂成分是什么？各有什么作用？（7分）

　　36如何证明提取到的某种核酸是DNA还是RNA？（6分）

　　37聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白时，使用的电泳缓冲液PH＝8.3，那么样品应点在哪端？为什么？（6分）

　　二、技能或实验操作考核题

　　38说明纸层析和离子交换层析分离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性质? 列出纸层析和柱层析的一般操作步骤。（10分）

　　39凝胶电泳的一般操作步骤（11分）

　　40普通离心机的使用操作（示范）（10分）

　　41可见分光光度计的使用操作（示范）（10分）

　　42如果要105摄氏度干燥某种物质，如何使用干燥箱（示范）? （10分）

　　43要称取某种药品2.0g，如何使用天平（示范）？（10分）

　　44要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液应如何配制？（10分）

　　45配制1L 0.01mol/L的HCl溶液应如何配制（已知浓盐酸比重是1.19g/L，重量百分比浓度为36.5％）？（11分）

　　46分别配制出10μg/ml，5μg/ml，2μg/ml，1μg/ml的DNA标准溶液，应如何配制？（尽可能节约）（10分）

　　答案：

　　1、盐析和盐溶：盐析：在蛋白质溶液中加入一定量的高浓度中性盐(如硫酸氨),使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。盐溶：加入少量中性盐可增加蛋白质的溶解度,即盐溶现象。

　　2、电泳：带电粒子在直流电场中向着 所带电性相反的电极移动的现象。

　　3、层析（色谱）：用不同物质在不同相态的选择性分配,以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，使混合物各组分以不同速度移动，从而达到分离的一种物理方法。

　　4、酶的活力单位：是指在特定条件下(25℃、最适的pH值和底物浓度),每分钟可催化1微摩尔(10-6摩尔)底物转化所需要的酶量。

　　5、比活力：代表酶制剂的纯度。根据国际酶学委员会规定比活力用每毫克蛋白所含的酶活力单位数表示。

　　6、分子筛效应：凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小“排队,凝胶表现分子筛效应。

　　7、电泳的原理：电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。

　　8、离子交换层析的原理：离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相,利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。

　　9、亲和层析的原理：亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理,将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。

　　10、凝胶过滤层析的原理：一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。凝胶过滤层析具有分子筛效应。

　　11、吸附层析的原理：组份在吸附剂表面吸附固定相是固体吸附剂,各能力不同而进行分离的方法。

　　12、透析技术的基本原理及其应用：

　　13、聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用途：①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。

　　②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子 的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。一 般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物 质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采

　　用含 丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。

　　③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。

　　④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺。丙烯酰胺称单体，甲撑双 丙烯酰胺称交联剂，在水溶液中，单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝胶。

　　14、按层析过程的机理，层析法分哪几类？按操作形式不同又分哪三类？：根据分离的原理不同分类，层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。

　　15、普通离心机的使用注意事项？：

　　(1).离心机要置水平位置,以保证旋转轴垂直地球水平面。

　　(2).使用前应检查套环是否平衡(台称)。

　　(3).离心杯及其外套(离心管套)是否平衡(台称)。

　　(4).样品倾入离心杯后应与离心管套一起两两平衡，平衡后把它们放置于转子的对称位置。

　　(5).盖好盖子,打开电源开关,调整离心时间。

　　(6).启动离心时转速应由小至大,缓慢升速(一般要2~3min)。

　　(7).达到预定转速后再调整离心时间至预定时间(10min)。

　　(8).离心完成后要调整调速连杆至零位,同时关上电源。

　　(9).要等到转速为零时才能打开离心机盖,取出样品。

　　16、可见分光光度计的使用注意事项？：（1） 使用过程中比色皿的四个面在槽中保持一定的位置,取用比色皿时手应该捏住四个棱而不能碰到面。比色皿应该避免磨损透光面。

　　（2） 使用过程中不得打开盖子，保持仪器清洁,为避免溶液洒落对仪器造成的腐蚀，所有溶液的配置、倾倒都不要在仪器附近操作。比色皿放进样品池之前必须把外表面擦干。

　　（3）当（仅当）操作者错误操作或其他干扰引起微机错误时，应该立即关断主机电源，重新启动，但无须关断灯源电源。

　　（4）光学器件和仪器运行环境需保护清洁。清洁仪器外表时 ,请勿使用乙醇乙醚等 有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩。

　　17、蛋白质含量测定的常用方法有那些？：（1）微量凯式定氮法。（2）双缩脲法。（3）folin－酚试剂法。（4）紫外分光光度法。（5）考马斯亮蓝染色法。

　　18、粗脂肪的提取和含量测定的基本原理。：脂肪是丙三醇(甘油)和脂肪酸结合成的脂类化合物, 能溶于脂溶性有机溶剂。本实验用重量法，利用脂肪能溶于脂溶性溶剂这一特性，用脂溶性溶剂将脂肪提取出来，借蒸发除去溶剂后称量。整个提取过程均在索氏提取器中进行。通常使用的脂溶性溶剂为乙醚或沸点为30oC -60 oC的石油醚。用此法提取的脂溶性物质除脂肪外，还含有游离脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等，故称为“粗脂肪”。

　　19、索氏提取器是由哪几部分组成的？：提取瓶，提取管和冷凝管三部分组成。

　　20、粗脂肪的提取和含量测定的简要操作步骤（6分）：1.抽提瓶在105℃±2℃烘箱中烘至恒重，材料干燥至恒重。

　　2.称取干燥后的材料1-2g,放入研钵中研磨(越细越好)将研磨好的材料用脱脂滤纸包住,用少许脱脂棉擦拭研钵壁上粘的材料及油脂,也一并放入滤纸包. 用棉线拴住滤纸包,将滤纸包放入抽提管，在抽提瓶中加入2/3体积的无水乙醚在70-75℃的水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数为每小时约10次，共回流约50次，或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留

　　下油迹为抽提终点。

　　3 取出试样，仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部吸完，擦净瓶外壁，将抽提瓶放入105℃±2℃烘箱中烘干至恒重。

　　21、粗脂肪的提取实验中如何减少误差？（6分）：（1）材料和提取瓶充分干燥。（2）材料尽可能的不损失。(3)提取充分完全。（4）提取后瓶子还要充分的干燥。

　　22、凯氏定氮法测定总氮量的基本原理（6分）：样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨,氨又与硫酸作用变成硫氨.经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液 被中和的程度可计算得样品氮的含量.以甘氨酸为例:

　　1.有机物中的氮在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4

　　反应式为： H2SO4==SO2+H2O+[O]

　　R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3

　　NH3

　　R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O

　　2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4

　　2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于 H3BO3 溶液中。

　　反应式为:2NH4++OH-==NH3+H2O

　　NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-

　　3. 再用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然

　　后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。

　　23、凯氏定氮实验中用到的主要器材有哪些？（6分）：凯氏烧瓶 ，容量瓶

　　凯氏定氮装置移液管 酸式滴定管 分析天平 电炉 烘箱

　　24、核酸的含量测定常用的方法有哪些？（6分）（1）紫外分光光度法；

　　（2）定磷法：钼蓝比色法

　　（3）定糖法：

　　RNA+盐酸——糠醛+地衣酚——Ａ670，鲜绿色；

　　DNA+二苯胺——Ａ595,蓝色化合物

　　（4）琼脂糖凝胶电泳法

　　25、双倒数法测定米氏常数的基本原理（6分）： Lineweaver和Burk将米氏方程改写成倒数形式：

　　26、双倒数法测定米氏常数的实验中，决定实验成败的因素有哪些？关键因素是什么？（7分）

　　27、生物细胞的破碎的常用方法有哪些？6分）：机械法：研磨，高速捣碎机；物理法：反复冻溶，超声波破碎，压榨法；化学雨生物化学法：自溶，溶胀法，酶解法，有机溶剂处理。

　　28、酶的制备及提取过程中常注意哪些事项？（6分）：

　　29、蛋白质的分离常用的方法有哪些？（6分）：1、前处理：选择适当的破碎细胞的方法破碎细胞，组织细胞破碎后，选择适当的介质（一般用缓冲液）把所要的蛋白质提取出来。2、粗分离：当蛋白质混合物提取液获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白质与其他杂蛋白质分离开来。一般这一步的分级用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这种方法的特点是简便、处理量大，既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白质溶液。

　　3、细分离：也就是样品的进一步提纯，一般使用层析法，包括凝胶过滤层析，离子交换层析，吸附层析以及亲和层析等。必要时还可以选择电泳法。

　　30、甲醛滴定法测定氨基酸的基本原理（6分）：

　　31、为什么SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用来测定未知蛋白质的相对分子质量？（6分）：在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS），形成蛋白质－SDS复合物，这种复合物由于结合了大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间的天然的电荷差异，此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。当蛋白质的分子量在15000～200000之间时，电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系，符合下列方程：

　　㏒10Mr = －b·mR + K

　　32、连续聚丙烯酰胺凝胶电泳与不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么不同？（6分）：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳包含了两种以上的缓冲液成分、pH值和凝胶孔径，而且在电泳过程中形成的电位梯度亦不均匀。由此产生的浓缩效应、电荷效应和分子筛效应。

　　33、聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点？（6分）：①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。

　　②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子 的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。一 般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物 质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。

　　③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。 ④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺。丙烯酰胺称单体，甲撑双 丙烯酰胺称交联剂，在水溶液中，单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝 胶。

　　34、琼脂糖凝胶电泳的优点？（6分）：（1）琼脂含液体量 大，可达98-99%，近似自由电泳，但是样品的扩散度比自由电泳小，对蛋白质的吸附 极微。（2）琼脂作为支持体有均匀，区带整齐，分辨率高，重复性好等优点。（3） 电泳速度快。（4）透明而不吸收紫外线，可以直接用紫外检测仪作定量测定。（5） 区带易染色，样品易回收，有利于制止备。然而琼脂中有较多硫酸根，电渗作用大。 琼脂糖是从琼脂中提取出来的，是由半乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多 糖。含硫酸根比琼脂少，因而分离效果明显提高。琼脂（糖）电泳常用缓冲液的pH在6-9之间，离子强度为0.02-0.05。离子强度过 高时，会有大量电流通过凝胶，因而产生热量，使凝胶的水份量蒸发，析出盐的结 晶，甚至可使凝胶断裂，