核酸实验室污染处理方案

核酸实验室污染处理方案

　　一、核酸实验室介绍

　　核酸检测实验室也就是我们所说的PCR实验室，实验室原则上分为4个单独的工作区域，试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区，当然有些实验室也会有扩增区和产物分析区，标本制备区的空间要大一点。

　　用换风次数保证实验室的洁净度，其实核酸检测实验室要求最高的就是各个区域的正负压，而且这些具备单相的人流、物流、和气流。

　　二、核酸实验室污染处理方案（精选5篇）

　　核酸是由许多核苷酸聚合而成的大分子化合物，其实也是蛋白质生物合成必不可少的物质，是生物遗传的物质基础，份子结构相对而言，随着现在人们对病毒的认识，核酸也越来越重要。以下是小编精心整理的核酸实验室污染处理方案（精选5篇），仅供参考，大家一起来看看吧。

　　核酸实验室污染处理方案1

　　目前国内所有二级以上综合医院都具备了核酸检测能力，大部分医院也设立了PCR实验室，高强度的核酸检测任务已然成为了我们检验人的工作常态，但是，如果一旦出现实验室污染，可能会造成假阳性结果，导致结果不可信，甚至可能会危及实验室工作人员安全。

　　应对核酸检测实验室污染的最好办法就是防患于未然，今天就带大家了解一下实验中我们如何避免和减少污染的产生以及处理污染。

　　一、污染的产生

　　在新冠病毒核酸检测过程中，常见以下几种污染类型：扩增片段的污染（产物污染）；天然基因组DNA的污染、试剂污染（贮存液或工作液）以及样本间交叉污染。核酸检测实验室污染的主要来源是扩增产物的污染。

　　实验室应通过以下途径及时发现污染：

　　1、采用每次检测过程至少3个阴性对照随机置于临床样本中间参与提取全过程。

　　2、每天对实验室内空气进行采样监测。空气监测范围应至少应包括样本制备区和扩增产物分析区。

　　3、定期对实验室台面、门把手、仪器设备表面进行取样监测。

　　4、阳性样本采用另外一到两种更为灵敏且扩增不同区域的核酸检测试剂对原始样本进行复核检测。

　　二、污染的防控

　　01严格实验室功能分区

　　原则上新冠病毒核酸检测实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、样本制备区、扩增和产物分析区。

　　根据使用仪器的功能，区域可适当合并。各区域在物理空间上应当是完全相互独立的。传递窗满足密封性要求，不能有空气的直接相通。各项检测工作应严格按相应规定在各自的区域内进行，严禁在样本制备区配制试剂。

　　各区的功能是：

　　1、试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的制备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。

　　2、样本制备区：转运箱的开启，样本的灭活（适用时），核酸提取及其加入至扩增反应管等。

　　3、扩增和产物分析区：核酸扩增和产物分析。

　　02确保实验室人、物及空气单向流动

　　核酸检测实验室的人、物及空气流向按照试剂储存和准备区→样本制备区→扩增和产物分析区，防止扩增产物随人流、物流及空气进入扩增前的区域。空气流向应按照从试剂储存和准备区→样本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。

　　03实验室检测安全管理

　　（1）基本要求

　　核酸检测应当在生物安全二级实验室进行，并应在生物安全风险评估的基础上，采取适当的个体防护措施，包括手套、口罩和隔离衣等。开展新冠病毒核酸检测的实验室应当制定实验室生物安全相关程序文件及实验室生物安全操作失误或意外的处理操作程序，并有记录。

　　（2）实验室前安全要求

　　应使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行桌面、台面及地面消毒。消毒液需每天新鲜配制，不超过24小时。转运至实验室的标本转运桶应在生物安全柜内开启。转运桶开启后，使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精对转运桶内壁和标本采集密封袋进行喷洒消毒。取出标本采集管后，应首先检查标本管外壁是否有破损、管口是否泄露或是否有管壁残留物。确认无渗漏后，推荐用0.2%含氯消毒剂喷洒、擦拭消毒样品管外表面（此处不建议使用75%酒精，以免破坏标本标识）。如发现渗漏应立即用吸水纸覆盖，并喷洒有效氯含量为0.55%的含氯消毒剂进行消毒处理，不得对标本继续检测操作，做好标本不合格记录后需立即进行密封打包，压力蒸汽灭菌处理后销毁。

　　如为采样管为非灭活管，实验室操作人员在进行标本热灭活时，温浴前需旋紧标本采集管管盖，必要时可用封口膜密闭管盖；温浴过程中可每隔10分钟将标本轻柔摇匀1次，以保证标本均匀灭活；温浴后标本需静置至室温至少10分钟使气溶胶沉降，随后再开盖进行后续核酸提取。

　　（3）核酸提取和检测安全要求

　　标本进行核酸提取和检测时应尽可能在生物安全柜内进行操作。如为打开标本管盖或其他有可能产生气溶胶的操作，则必须在生物安全柜内进行。

　　（4）实验室结束后清洁要求。

　　需要对实验室环境进行清洁，消除可能的核酸污染。

　　①实验室空气清洁。实验室每次检测完毕后，可采用房间固定和/或可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上。必要时可采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸。

　　②工作台面清洁。每天实验后，使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行台面、地面清洁。

　　③生物安全柜消毒。实验使用后的耗材废弃物放入医疗废物垃圾袋中，包扎后使用0.2%含有效氯消毒液或75%酒精喷洒消毒其外表面。手消毒后将垃圾袋带出生物安全柜放入实验室废弃物转运袋中。试管架、实验台面、移液器等使用75%酒精进行擦拭。随后关闭生物安全柜，紫外灯照射30分钟。

　　④转运容器消毒。转运及存放标本的容器使用前后需使用0.2%含氯消毒剂或75%酒精进行擦拭或喷洒消毒。

　　⑤塑料或有机玻璃材质物品清洁：使用0.2%含氯消毒剂或过氧乙酸或过氧化氢擦拭或喷洒。

　　（5）转运容器消毒

　　转运及存放样本的容器使用前后需使用有效氯含量为0.2%的消毒剂或75%酒精进行擦拭或喷洒消毒。

　　04强化实验室检测过程控制

　　实验室接到样本后，应当在生物安全柜内对样本进行清点核对。按照标准操作程序进行试剂准备、样本前处理、核酸提取、核酸扩增、结果分析及报告。实验室应当建立可疑样本和阳性样本复检的流程。

　　（1）试剂准备

　　应当选择国家药品监督管理部门批准的试剂，并在选择样本采样管和核酸提取试剂时，使用试剂盒说明书上建议的配套样本采样管和提取试剂。

　　（2）样本灭活

　　已经使用含肌盐的灭活型样本采样管的实验室，这一环节无需进行灭活处理，直接进行核酸提取。使用非灭活型样本采样管的实验室，可采用56℃孵育30分钟热灭活的处理方式。

　　（3）核酸提取

　　将灭活后的样本取出，在生物安全柜内打开样本采样管加样。核酸提取完成后，立即将提取物进行封盖处理。在生物安全柜内将提取核酸力口至PCR扩增反应体系中。

　　（4）核酸扩增

　　将扩增体系放入扩增仪，核对扩增程序是否与试剂说明书相符，启动扩增程序。扩增后的反应管不要开盖，直接放于垃圾袋中，封好袋口，按一般医疗废物转移出实验室处理。

　　三、污染的消除

　　实验室一旦发生污染，检测工作应立即停止，直到确认消除污染后才能重新开始检测。首先，要查找污染源和明确污染范围。然后，根据污染源和污染范围采取有效的去污染措施，结合各种不同方法以达到最佳效果。

　　实验室污染的处理：

　　1.标本污染生物安全柜的操作台造成局限污染时：立即用吸水纸覆盖，并使用0.55%含氯消毒剂进行喷洒消毒。消毒液需要现用现配，24小时内使用。

　　2.标本倾覆造成实验室污染时：

　　保持实验室空间密闭，避免污染物扩散。立即使用润湿有0.55%含氯消毒剂的毛巾覆盖污染区。必要时（如大量溢撒时）可用过氧乙酸加热熏蒸实验室，剂量为2g/m，熏蒸过夜；或20g/L过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾，用量8ml/m，作用1-2小时；必要时或用高锰酸钾-甲醛熏蒸：高锰酸钾8g/m，放入耐热耐腐蚀容器（陶罐或玻璃容器），后加入甲醛（40%）10ml/m，熏蒸4小时以上。熏蒸时室内湿度60%-80%。

　　3.清理污染物时：

　　严格遵循活病毒生物安全操作要求，采用压力蒸汽灭菌处理，并进行实验室换气等，防止次生危害。

　　核酸实验室污染处理方案2

　　发现污染第一步就是要暂停实验，评估假阳性对以往检测结果的影响。对实验进行彻底打扫和清理，尽可能更换相关的试剂耗材，对仪器设备进行清洁和去核酸处理。

　　1.化学处理法

　　使用商品化的核酸去除剂，核酸去除剂是一种非碱性、无腐蚀性的核酸去除溶液，对人体无害的非致癌性物质组成，通过对基础RNA和DNA的非可逆性摧毁，达到去除核酸污染的目的。对人体无毒无害。

　　2.物理处理法

　　使用紫外灯照射。

　　核酸污染处理的难点

　　1.移液器

　　移液器内部被污染很难去除，可以通过清洗或者另换一套移液器。

　　2.生物安全柜

　　移除内部所有物品，用核酸去除剂擦拭表面后，打开柜门连续运行。

　　3.核酸提取仪内部

　　用核酸去除剂擦拭内表面后，打开提取仪门或外罩，静置。

　　如果能及时发现污染，通常情况不会太严重，采取上述措施实验室空置几天污染会消除。但是如果发生了很严重的污染，采取上述措施污染仍不能消除，就要采取专业的设备方案进行去除：

　　欧菲姆核酸干雾消毒器，采用独有的干雾发散远离，配合低温冷蒸发技术，可以将核酸去除液发散成平均粒径1微米的颗粒。均匀的扩散在空气中，无死角的覆盖在整个核酸实验室，并快速吸附空气中的气溶胶，分解掉核酸污染源。

　　欧菲姆核酸去除干雾消毒器适用于微生物实验室、动物房实验室、PCR实验室、P3及P4实验室，是当下国内去除PCR实验室核酸污染的`佼佼者。

　　核酸实验室污染处理方案3

　　疫情在全球的大流行对各国公共卫生和全球经济造成严重威胁，了解和遏制新冠病毒的环境传播模式对各国制定相关公共卫生政策至关重要。早发现并进行流动性管控是快速控制新冠病毒传播的方法，新冠病毒核酸荧光定量PCR检测由于其高灵敏度和准确性成为公认的金标准。

　　在新冠病毒检测中，核酸检测结果是主要的判定依据，而分子实验室环境的清洁程度是保证核酸检测结果准确的必要条件。高效DNA清除剂能够降解长片段核酸和PCR后短片段核酸产物，经过电泳未见明显条带；通过qPCR检测核酸剩余量，显示清除效率达到了99.9%；对桌面、仪器等表面处理，其表面累积的核酸量也有很明显的降低。DNA清除剂为分子实验室日常清洁处理和已发生核酸污染的实验室处理提供了解决思路。

　　分子诊断实验室常见的消毒杀菌方法：

　　1、紫外光照射和高压灭菌来处理实验耗材中的DNA污染，有实验证明，高压灭菌（128℃，420min）后，再次干燥，暴露于10~60J/cm2的紫外光照射下能够清除，但此方法耗费时间长并且紫外线透射度有限、高压灭菌对耗材有选择性等局限。

　　2、无菌医疗产品常用环氧乙烷（EO）气体来灭菌，通过EO处理3h可使PCR扩增的DNA减少104个数量级，因此利用EO来阻止DNA扩增的方法是有效的，但是EO并不能完全清除DNA污染，且作用后会有副产物遗留，导致这种方法难以在分子实验室应用。

　　因此，需要寻求一种更便捷的办法来预防或减少核酸污染。核酸清除剂是目前市面上商品化使用的专门清除核酸污染的试剂，针对性强、效果好且毒性小。润联环保旗下的诺沃赛德核酸清除液，诺沃赛德Novocide是国内唯一一款可以用于空间喷雾的核酸去除剂，试剂特点：不含过氧化氢，PH值接近中性，不含酶，强效的DNA的片段捕捉粘合剂，腐蚀性极低。

　　诺沃赛德核酸污染去除液，能够强力高效的去除实验室中核酸污染问题。搭配比林科汉核酸污染清除仪能够达到1+1>2的效果。比林科汉核酸污染清除仪采用独特的干雾发散原理，超高速喷射，可以将核酸清除剂发散成小于1微米的颗粒，均匀扩散到空气中，以气溶胶的形式捕获核酸片段并分解掉污染源。其优点是覆盖面积广，纳米级干雾渗透性好，气溶胶均匀扩散，智能化系统，单位用量少成本低。非常适合分子诊断实验室去除核酸污染。

　　核酸实验室污染处理方案4

　　由于疫情的突发，各地PCR基因扩增实验室的建设也逐步加快，病毒核酸检测是诊断的重要标准，pcr实验室又称为基因扩增实验室，利用分子生物学技术，通过放大核酸片段，也可以看做是生物体外的特殊核酸复制。利用基因追踪系统，掌握人体内部的病毒含量，试验的精确度可达到纳米级别，核酸检测也属于此类技术，诊断的重要标准。

　　PCR基因扩增实验室主要就是对检测核酸模板进行扩增，由此可见，易出现的就是对实验室交叉污染而导致检测的标本出现假阳性结果，所以，PCR实验室对预防交叉污染有着严格的设计要求和标准。

　　现在PCR技术已经在传染病、肿瘤靶向、生殖遗传等领域被广泛应用，但因为该技术对待测核酸进行了多次、大量的扩增，所以即使极微量的污染也容易导致结果出现假阳性；其次PCR技术要求相对较高，实验过程繁复，中间环节如果出现遗漏疏忽，就有可能导致结果假阴性。

　　PCR实验过程中易发生污染产生污染主要有以下4个原因：

　　1、是PCR扩增产物的污染。这也是见的污染原因。PCR产物经反复多次的扩增，其复制量远远超过PCR的检测极限，所以即使是极微量的污染也足以造成实验结果假阳性。

　　2、试剂的污染。在试剂的配制过程中，接触了污染的容器、移液器、枪头、溶液等物导致试剂被污染。

　　3、待测样品被污染。放置样品的容器被污染或由于容器密封不严导致样品与外界接触被污染；其次在核酸提取过程中使用了被污染的移液器或枪头导致样品被污染；另外，某些样品中含毒，若弥散到空气中则有可能形成交叉污染。

　　4、气溶胶污染。若气溶胶中包含病毒等污染物扩散至空气中极有可能造成PCR产物污染。气溶胶是由空气与液体表面摩擦而产生的，开盖、晃动反应管及污染加样器的反复吸样都可形成气溶胶从而导致交叉污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因此，应尤其重视由气溶胶导致污染的问题。PCR实验室只要出现了污染，之前的结果报告就变为无效而且也无法进行其他的实验操作。必须找出并清除污染源，才能得到准确有效的实验结果。

　　Pcr实验室如何进行空间消毒预防污染？

　　针对pcr实验室的消毒，法国进口的欧菲姆干雾灭菌设备，采用先进的过氧化氢干雾灭菌技术，达到枯草芽孢杆菌2.5×10的6次方的杀灭率。方便快捷，灭菌时间快，腐蚀性极低，安全无残留。

　　法国欧菲姆过氧化氢干雾灭菌器采用了进的雾化技术，雾化颗粒小于3微米，增效了空间扩散均匀性，迅速弥漫充满整个空间，不放过每一处死角，灭菌效果。适应大空间灭菌，小空间灭菌更灵活。

　　欧菲姆过氧化氢灭菌优势：

　　1、杀菌效果好，对嗜热脂肪杆菌芽孢10分钟有6个对数值的杀灭率，快速高效去除实验室核酸污染源。

　　2、广谱的杀菌能力，能杀灭包括病原菌、芽孢、及病毒在内的200多种微生物。

　　3、干雾颗粒，扩散性非常优良，能扩散到每一个卫生死角落，在空气中做不规则布朗运动。

　　4、无残留，安全可靠，分解。验证资料齐全，提供验证模板。

　　5、杀菌时间超短，设备体积小，操作方便，灵活移动满足不同空间需求，适应大空间灭菌。

　　核酸实验室污染处理方案5

　　近年来，核酸检测技术在我国得到逐步的推广和应用，并已成为血液筛选查实实验室的重要实验手段，但因其灵敏度高的特点，同时实验室也容易导致污染，特别是核酸的气溶胶污染比较严重。如何预防和处理PCR核酸实验室污染为本文讨论的重点。

　　关键词：分子诊断，核酸检测，核酸污染，DNA，RNA，PCR，DNA测序，原位杂交，SNP，基因芯片，假阳性。

　　核酸污染是困扰绝大多实验室的一个难题。微量的核酸污染会产生假阳性的检测结果，这样会对病人造成误诊，耽误病情。如任由此情况发展，会形成气溶胶污染而扩散，终导致整个实验室的污染，严重的会关闭实验室，如无备用实验室，会造成更大的损失。是否有一种快速彻底的解决方案呢？且看下面。

　　分子诊断是指利用分子生物学方法来检测样品中遗传物质的结构或表达水平的变化从而做出相应诊断的技术。由于分子生物技术的发展，人们生活水平不断提高记忆对健康问题更为重视，分子诊断得以迅猛发展，市场份额快速提高。我国分子诊断产业虽然起步较晚，但现已与欧美，日本，新加坡等起步较早的国家之间的的差距也越来越小。

　　而由于日常检测中要处理大量的不同来源的核酸以及核酸本身难以降解的特性，核酸污染是困扰绝大多实验室的一个难题。微量的核酸污染会产生假阳性的检测结果，这样会对病人造成误诊，耽误病情。如任由此情况发展，会形成气溶胶污染而扩散，终导致整个实验室的污染，严重的会关闭实验室，如无备用实验室，会造成更大的损失。

　　在与核酸污染长期抗争中，人们也总结出了一些预防和清除核酸污染的方法。对于预防，实验人员一定要不断改进并严格遵循实验室操作流程，对实验室不同操作进行区域划分，分装试剂，定期对实验仪器进行灭菌，实验室适当通风，养成实验中进行阴阳对照的好习惯。

　　当污染已经出现，传统的清除方法包括对可疑器用稀酸进行擦拭或浸泡，紫外线照射，对反应液用DNaseⅠ或内切酶进行处理等方法。这些方法对一些微量污染会有一定效果，但对污染效果不是很理想，而且紫外线照射会对人体造成一定的危害。

　　污染传统处理方法：

　　准备（1：50）、（1：10）高效消毒液，75%无水酒精。

　　2.5.1把STAR上的所有载架都拿出来，用1：50的高效消毒液进行擦拭，待作用五分钟后用清水冲洗。

　　2.5.2SATR内部用喷壶喷洒75%无水酒精，底部金属部分可用1：50的高效消毒液进行擦拭，待酒精完全沉降后，用清水擦拭。

　　2.5.3实验室内工作台用1：10的高效消毒液进行擦拭，实验室内部用喷壶喷洒1：50的高效消毒液，等待空气中的高效消毒液沉降后，用1：50的高效消毒液拖地，建议当天不用清水擦拭或拖地，待第二天早上来再用清水擦拭拖地。

　　2.5.4实验室用的耗材（除用自封袋封好的），能灭菌的，均用备用灭菌锅进行一次灭菌。

　　2.5.5机器通道污染的处理，将配置好的高效消毒液（1：50）代替裂解液，加入裂解液槽里，完成加裂解液的过程，在机器每次吸取一定量的高效消毒液后，暂停十分钟，让高效消毒液挥发到通道内部，反复四次即可，这个过程中用的枪尖同样不带滤芯。后将裂解液槽里的高效消毒液（1:50）用水洗净后换上蒸馏水重复以上程序。（此类方法正常情况下不建议使用，只有在污染去除不了时才慎重使用。用该方法处理过机器后，当天不再做核酸实验）。

　　总之，对于核酸污染大家一定要给予足够的重视，提前预防，不要等到污染已经出现才想办法清除，经常在实验室中配备清除污染的试剂，发现污染可马上进行处理，相信这样核酸污染将不再是让众多实验人员头疼的问题。

　　注：实验室的污染不可能一次就清理干净，需反复清理验证，直到实验结果能被采用为止。

　　核酸实验室污染的主要原因有：

　　1）标本污染；2）试剂污染；3）产物污染；5）其他污染。

　　其解决措施为：其解决措施为：

　　1）标本污染，重新采样进行检测，评估标本前处理环节；

　　2）试剂污染，更换新的试剂重新检测评估；

　　3）设备污染，设备整体消毒清洁、维护；

　　4）产物污染，全面清洁消毒实验室、仪器设备所有实验有关用品。一旦发生污染后，围绕实验室寻找污染源分析污染原因耗时且很繁琐，所以防止污染重在预防。

　　因核酸实验室污染后极其难以清除，有可能造成实验室不能使用的风险。但是如果一旦出现核酸实验室污染，除了上面常规的消毒清洁方法之外，另外还有一种比较好使而且快速全面彻底的实验室空间灭菌方法。根据国外DNA研究所大量实践证明空间熏蒸消毒确实有效去除核酸污染源，时间短、高效、安全、节省劳动力等等优点。此空间熏蒸消毒方法为法国过氧化氢干雾消毒技术，整体核酸实验室覆盖，无死角，快速分解掉核酸污染源，消毒完后，随着排风即可清除而无残留，省时省力。特别适用核酸实验室气溶胶污染。

　　在众多的过氧化氢消毒技术当中，据大数据得知，法国的过氧化氢干雾消毒技术由oxypharm制造的消毒机力压群雄，成为行业消毒去除PCR实验室核酸污染的佼佼者。（高效并且持久）

　　法国oxy过氧化氢干雾消毒方案的精妙之处在于的解决方案，巧妙利用了特别的干雾设备+过氧化氢杀孢子剂（高纯低浓度）的完美配合，组成无懈可击空间消毒方案，避免了过氧化氢蒸汽的腐蚀性和解决了扩散性问题。

　　oxypharm过氧化氢消毒器采用独到而特殊的结构设计，使得在仅仅输入电能的情况下，集压缩、ventur喷射和雾滴内外部溅射碎化功能于一体，使专用液态杀孢子剂变成气雾状态极微小颗粒喷出，高速极小微粒与空气接触后充分气化，变成气态过氧化氢即为“干雾”。此干雾具备良好的扩散性和细菌杀灭效果。

　　此过氧化氢干雾消毒器的特点为：

　　1、灭菌效果好，生物指示剂挑战降低6lg对数值，能彻底杀灭环境中的MRSA、VRE、结核分枝杆菌、芽孢、病毒和多重耐药的革兰阴性菌（鲍曼不动杆菌）；

　　2、活性氢氧基团能高效分解DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物质；

　　3、快速空间灭菌，比起喷雾或熏蒸所需要的时间更短，实现更快速的密闭空间灭菌措施，预防核酸实验室环境空气污染及核酸片气溶胶污染，及快速高效去除实验室核酸污染源；

　　4、小于3微米干雾气体，扩散性优越，能扩散到每一个角落，空气中做布朗运动，消毒干雾无孔不入，专门对付小分子核酸污染源物质；

　　5、消毒干雾相对一般过氧化氢稳定，自然损耗小，维持的灭菌浓度均匀，基本不受温度、环境湿度的影响（真正的干雾才能做到这点）；

　　6、无色无毒，无残留，安全可靠，当天使用消毒清除污染，当天即可使用实验室，换回损失。